（1甘肃农业大学草业学院，兰州730070；2甘肃省农垦农业科学研究院，兰州733006）
摘要：2006年对万寿菊叶斑病在甘肃主要栽培区的武威黄羊镇、古浪、景泰等地发生情况的调查结果表明，发病率在33% - 85%，病情指数在5.7 - 48.0。通过室内分离鉴定，确定引起当地万寿菊叶斑病的病原为真菌类的链格孢Alternaria sp．。
关键词：万寿菊；叶斑病；病害调查；病原鉴定；链格孢
万寿菊（Tagetes erectaL）作为观赏植物和药用植物在世界上有广泛分布，是园林中常见的草本花卉。作为药用植物，其花和根可入药，有清热解毒、化痰止咳、解毒消肿之功能L1.21。近年来，其鲜花又成为提取天然食用色素的一种工业原料，市场应用前景广阔，国际需求量不断增加。但是随着种植面积的扩大，病虫害的严重发生成为其发展的一个限制因素，特别是万寿菊叶斑病的发生，可导致万寿菊叶片早枯，花蕾凋萎。其发病率一般在20% - 30%，严重时可达95%以L，尤其7月中旬以后显著加重，而且蔓延迅速，短时间内即可蔓延至全田，普遍发牛，造成严重损失。为了搞清引起叶斑病的病原，以期为生产上有效地控制该病提供依据。
1材料与方法
1.1万寿菊叶斑病田间调查
2005年9月至2006年9月，先后对甘肃省武威市黄羊镇、古浪县和白银市景泰县万寿菊栽培基地万寿菊叶斑病的发生情况（病害的发生、为害程度、产量损失估计）进行了专项调查。调查采用5点取样法，每样点取样20株。对栽培区不同发病类型进行调查、采样，采集不同阶段不同发病部位及不同症状表现的植株，将标本用吸水纸压干，填写好标本登记卡，以备室内鉴定。
调查分级标准如下：0级——植株无症状；1级一植株下部叶片有零星病斑，发病叶片少于1%；2级——植株中部、下部叶片发病，发病叶片在1% - 5%之间；3级一植株叶片发病在5% - 20%之间，病斑有愈合发生；4级——植株发病严重，叶片枯死，花及花萼受到侵染枯死变黑。
1.2万寿菊叶斑病的症状描述
在室内首先对标本进行症状描述：病斑着生部位、形状、颜色、大小及其它特征等。
1.3病原菌的分离与纯化
在室内对植株不同发病部位（叶、茎、花）进行常规分离，即切取小块病组织，用75%的酒精擦拭组织表面后用0.1%的升汞水溶液表面消毒1 min，然后用无菌水冲洗3次，将病组织移植于PDA平板培养基上，在25℃下培养，待长出菌落后将分离物进行编号；利用2%琼脂培养基进行稀释纯化，将配好的孢子液滴移到琼脂平板培养基，镜检只有单个孢子的部位，做好标记再移植，从而得到纯培养菌株。
1.4致病性测定
将获得的各菌株用PDA培养基培养于25℃温箱中培养5-7天，配成浓度为105 - 106个孢子／mL的孢子悬浮液，分别采用普通喷雾法、高压喷雾法及摩擦接种法对健康万寿菊植株进行接种[3-5]。接种后置于25℃温室内，连续观察并记录发病情况、发病症状，之后再分离。
1.5病原菌形态特征
对有致病性的菌株，依据真菌学常规方法，在PCA平板培养基卜培养5-7天，观察并记录各菌株的菌落形状、色泽；用显微镜镜检测定分牛孢子梗的大小、着生部位、形态，记载分生孢子纵横隔膜的数目、颜色，喙的有无、长短及形态。按照分类系统确定病原菌的种类。对有些不产孢子的种类，采用不同的营养要求和培养条件来诱发和刺激产孢，根据相关文献鉴定病原种类。
2结果与分析
2.1田间调查结果
从调查结果（表1）可以看出，万寿菊叶斑病在甘肃省黄羊河农场、古浪县和景泰县万寿菊栽培基地普遍发生，发病率—般在23% - 95%。但发病的严重程度各地差异较大，病情指数低的只有5.75，病情指数最高的地块可达48.5;从各地的发病情况来看，白银市景泰县病害发生较为严重，武威市黄羊河农场次之，古浪县发病相对较轻；从不同前茬作物与发病的关系看，前茬为胡麻发病严重，荒地或贫瘠土地发病也较重，前茬种植大麦、小麦和玉米发病次之，前茬为百号(种药用植物)发病较轻。
2.2万寿菊叶斑病的症状
万寿菊叶斑病在甘肃省万寿菊栽培区从幼苗期到成株期均可发牛，病菌主要为害叶、茎、花。
(1)苗期发病，叶片正面产生针尖大小褐色或红褐色圆形、近圆形病斑，病斑中央灰白色或黄白色，边缘黑褐色，叶片背面的病斑边缘不规则。温湿度适宜时，病叶上密布褐色小点，并可愈合成片，严重时造成叶片枯死，导致死茁。
(2)成株期叶片发病，自下部叶片逐渐向上部蔓延，从叶片缘处或从叶片巾部开始发生。初期病斑如针尖大小，褐色，圆形或椭圆形，少数不规则形，巾央灰白或黄白色，边缘黑褐色坏死，叶背面的病斑呈黄褐色。病斑一般直径大小为0.5 mm，最大直径可达7.0 mm。以后病斑逐渐扩大形成椭圆形或不规则形的紫褐色病斑。发病严重时，病斑连片，造成叶片枯死。
(3)茎部染病，多从叶腋处先发生，并向新生枝及主茎扩展，造成病部变褐变紫，病斑多为圆形或长椭圆形。严重时，病斑可以布满茎表，使茎的表皮呈紫褐色，造成植株生长衰弱。摘花后常从摘口处向下变黑干枯。
(4)花部受害，多从花萼开始，初为褐色小点，中央灰白色，边缘有紫褐色坏死线，以后逐渐扩展，并引起花瓣染病，引起花瓣凋萎，严重时整朵花密布病斑，花瓣变褐枯死，苞片变黑，严重影响产量和品质。
2.3病原菌分离
采用组织分离法，在PDA培养基上先后分离200个病块组织，分离到160个菌落。根据菌落形态将其归为3类，其中链格孢属(Altemaria sp.)为149株，占74.5%，灰霉菌(Botrytis sp.)为4株，占2%，其他7株，占3.50/。
在链格孢中，根据菌落颜色分为H1和H2两类。
2.4致病性测定
对链格孢的2种菌株采用摩擦和喷雾接种方法均可使植株发病（表2），发病症状与田间一致，从接种的健康万寿菊植株上均可熏新分离获得同一病原菌，说明病菌可以从伤U或自然孔口直接侵入，但有伤口比无伤口发病速度更快，且致病率高。
2_5病原菌的形态特征
对分离到的致病菌，在PDA和PCA平板培养基卜培养，1周后的菌落形态是：菌落墨绿色或橄榄色，后期黑褐色，气生菌丝丰富，棉絮状，分生孢子梗单生或簇生，直或向一侧弯曲，浅褐色，有分隔。分生孢子的大小为(18.3 - 25.4)×(8.8 -12.0)um，平均为21.6×10.6 um;倒棍棒形、长卵圆形、梭形等；初色浅，后呈黄褐色、深褐色；有2～4个横隔，0-3个纵隔，分隔处有缢缩；喙较短，柱状，大小为(2.74 - 4.5)×(2.4 - 4.16)“m．无分隔。
分离到的2个菌株，尽管菌落颜色有一些差异，但在主要形态特征方面没有显著差异，认为属于同一种，确定为链格孢(Alternaria sp．)。
该菌与万寿菊链格孢(Alternaria tagetica)的形态明显不同，与侵染菊科植物的链格孢(Altemaria sonchi)类似，但有关其它链格孢为害万寿菊的报道还未见诸于文献。有关种类有待于进一步深入斫究。
3小结
通过本次调查和病原菌鉴定，初步确定引起万寿菊叶枯病的病原是真菌链格孢(Alternaria sp.)。进一步摸清了甘肃省武威黄羊河农场、古浪、白银地区景泰县万寿菊叶斑病的病害发生、分布、为害情况。调查结果表明，该病在上述地区普遍发生，发病率一般在50% - 80u/0，轻者也有20%，严重地块达到95%。发病率高，但早期没有引起重视的原因是：万寿菊栽培密度较大，早期不易被发现。在调查时发现，所有底部叶片几乎都有叶斑发生，说明叶斑病在早期就发病普遍，只是在生长后期才为害植株上部，导致花器、心叶枯死。所以应注意及早观察底部叶片的发病情况，以便及时有效地实施防治。
