李晓青，张晓申，杨录军
摘要：采用茎尖诱导原球茎的方法对大花蕙兰“瀑布”进行初代组织培养，结果表明，最适诱导培养基为MS，最好消毒方式是用0.1%的升汞处理10 min，对大花蕙兰的原球茎诱导和增殖及幼苗分化的作用极显著。
关键词：大花蕙兰；组织培养；原球茎
大花蕙兰（Cymbidium）是兰科兰属中一部分大花附生种及其杂交种的统称，属复茎地生兰或半附生兰，原产地在喜马拉雅山脉及东南亚高山上，是世界五大重要商品兰花之一。为近几年在我国花卉市场上流行的高档室内盆栽花卉，具有极高的观赏价值，株型高大雄伟，花大而多，色彩鲜艳。由于大花蕙兰多为杂交种，种子繁殖无法保持其品质特性，其结实率也相当低；分株能力弱，繁殖系数低、速度慢，远远不能满足商品化生产的需求。笔者进行了大花蕙兰初代组织培养的研究，以筛选最好诱导和增殖培养基。
1 材料与方法
1.1材料
供试材料采自郑州市农林研究所兰花园，品种为“瀑布”。
1.2方法
1.2.1外植体的消毒处理
首先切取健康饱满10—15 cm长的芽，剥去外部叶片，用自来水洗净，用蒸馏水洗3次，然后在超净工作台上用0.1%的升汞消毒3、5、8、10、12 min，无菌水冲洗4-6次。在无菌条件下，将5mm大小的茎尖切下接在培养基上，培养基为：MS +BAl.O mg/L+NAAO.I mg/L+香蕉汁50.0 g/L，每个培养瓶接1个茎尖，每处理10瓶，30天后观察原球茎的诱导情况。
1.2.2不同培养基对原球茎的诱导
设置KC、改良KC、MS、VW(附加BAl.O mg/L+ NAAO.I mg/L+香蕉汁50.0 gfL)4个处理，每处理10瓶，每瓶接1个茎尖。培养30天，调查不同处理的原球茎的诱导率。
1.2.3不同激素配比对原球茎诱导的影响
进行细胞分裂素BA和生长素NAA不同浓度对原球茎诱导情况的观察，培养基均附加香蕉汁50.0 glL，每处理10瓶，每瓶接1个茎尖，培养30天，统计原球茎诱导率。
1.2.4激素与添加物对增殖及幼苗分化的影响 设置BA、NAA和香蕉汁3个因子，3水平，BA水平1、2、3分别为10、15、2.0，NAA水平1、2、3分别为0.1、0.3、0.5，香蕉汁水平1、2、3分别为70.0 g/L、100.0 g/L、130.0 g/L。每处理10瓶，每瓶接10个原球茎，重复3次，培养40天，调查增殖系数和幼苗分化数。
1.2.5培养条件
蔗糖30.0 g/l，琼脂7.0 g/L．活陛炭0.5 g/L，温度24 - 26℃，光照强度1000 - 1800 lx，光照时间12-14 h/d。
2结果与分析
2.1不同消毒时间对原球茎诱导的影响
从表1可以看出，初代培养物的污染率随消毒时间的延长而下降。从5 min到8min，污染率急剧下降，消毒时间在10 min时，存活率最高，之后茎尖有被杀死的可能。故“瀑布”初代培养的外植体用0.1%升汞消毒时间为10 min最好。
2.2不同培养基对原球茎诱导的影响
试验采用4种基本培养基，其他条件一致，经过30天的培养，调查结果为：KC、改良KC、MS、VW四个处理原球茎的诱导率分别为40%、50%、90%和60%。说明大花蕙兰原球茎的诱导需要大量的无机盐类，4种培养基除了MS无机盐含量较高，其余3种培养基无机盐含量都低。故原球茎诱导的最适培养基是MS。
2.3不同激素配比对原球茎诱导效果的影响
从表2可以看出，随着6-BA浓度的增大，原球茎诱导率逐步增高，在6-BAl.O mg/L时达到最大，6-BA浓度再继续增大，原球茎诱导率则下降；NAAO.1 mg/L有利于原球茎诱导；在培养基MS+6-BAlO mg/L+NAAO.1 mg/L+香蕉汁50.0 g/L+活性炭0.5 g/L上原球茎诱导率达到90%，并且每个茎尖分化出5～7个原球茎。
大花蕙兰原球茎在增殖的过程中有幼苗的分化，长时问不转接，会形成很多苗，因此增殖与幼苗分化为同时进行。从表3可以得出，对增殖影响最大的因素是BA，适宜浓度为1.5 mg/L，其次是NAA，适宜浓度为0.5 mg/L，最弱是香蕉汁，适宜浓度为130.0 g/L。综合考虑增殖系数和幼苗分化对下一代生根壮苗的影响，最适增殖及幼苗分化培养基是：MS+6-BAl.5 mg/L+NAA0.5 mg/L+香蕉汁130.0 g/L+活性炭0.5 g/L。
3小结
大花蕙兰通过茎尖诱导原球茎进行组织培养，可以大大提高其繁殖速率。激素对大花蕙兰“瀑布”初代培养有较大影响。
本研究表明，大花蕙兰“瀑布”外植体最好消毒时间是10 min，最好培养基是MS，适宜原球茎诱导的培养基是MS +6-BAl.O mg/L+NAAO.1 mg/L+香蕉汁50.0 g/L十活性炭0.5 g/L+蔗糖30.0 g/L，适宜原球茎增殖及幼苗分化的培养基是MS+6-BAl.5 mg/L十NAA0.5 mg/L+香蕉汁130.0 g/L+活性炭0.5 g/L+蔗糖30.0 g/L。
