不同钙浓度处理对盆栽东方百合生理指标的影响
1.根系活力的测定
采用氯化三苯基四氮哩(TTC)法测定根系活力(孔祥生，2008)。主要因为TTC还原量能表示脱氢酶活性，并作为根系活力的指标能准确反映根系主动吸收的能力。
主要步骤为把根尖样品清洗干净，称取0.5 g放入50 mL离心管中，加入0.4% TTC溶液和磷酸缓冲液的各5 mL混合均匀，在37℃下暗处保温1h，把根取出后，吸干水分后加乙酸乙酷研磨成匀浆，提出三苯基甲攒(TTF)。用紫外可见分光光度计(UV 1800 )在485 nm波长下进行比色，根据标准曲线求TTC还原量。每个处理均重复3次。
2.丙二醛(MDA)的测定
采用硫代巴比妥酸比色法测其含量(孔祥生，2008)加pH7.8磷酸缓冲液冰浴研磨成匀浆后定容至10酸(TBA)溶液，摇匀后将试管放入沸水浴中煮沸mL。
主要步骤为称取0.5 g样品，而后加入5 mL 0.5%硫代巴比妥15 min冷却后3000 rpm离心10 min用紫外可见分光光度计(UV 1800 )测定波长532 nm, 600 nm和450 run处的吸光值，根据公式，计算出丙二醛的含量。每个处理重复3次。
3.抗氧化酶的测定
采用氮蓝四哇取新鲜百合叶片加(NBT)法测定超氧化岐化酶(SOD)的活性(李合生，2001)。称50 mmo1}L'' pH7.8浆，于4℃下3000 rpm离心15 min磷酸缓冲液(内含I%聚乙烯毗咯烷酮)研磨成匀上清液即为SOD粗提液。反应体系中含有:130m/L'，甲硫氨酸(Met )，750 }mol}L'1NBT} 100 pmol}L''EDTA-Na2} 20 pmo1}L'，核黄素。25 0C 4000 lux光照强度下反应10 min。然后用紫外分光光度计(UV-I 800 )测定于560 nm吸光值。以抑制氮蓝四哇(NBT)光化还原的50%为一个酶活性单位。根据公式，计算出SOD活性。每个处理重复3次。
采用紫外吸收法测定过氧化氢酶(CAT)活性(孔祥生，2008)。称取新鲜百合叶片O.Sg置研钵中，加入pH7.0磷酸缓冲液2 mL冰浴研磨成匀浆定容到10 mL并混匀，在4000 rpm下离心15 min，即得CAT粗提液。反应体系中含有0.1 mo1}L'' pH7.0磷酸缓冲液(内含1%聚乙烯毗咯烷酮)，0.1 mol}L-' HZOz，0.1 mo1}L-' KMnO;和0.1 mol}L''草酸(用于标定)。25℃预热后，立即用紫外分光光度计(UV 1800 )测定240 nm下连续4 min内的吸光值。以每分钟A240减少0.1的酶量为1个酶活单位(U)。根据公式，计算出CAT活性。每个处理重复3次。
以邻甲氧基苯酚(即愈创木酚)为过氧化物酶(POD)的底物，采用比色法测鸟POD活性(李合生，2001)。称取新鲜百合叶片0.5 g，加0.02 mo1}L-'KHZPO;研磨成匀浆，于4℃下3000 rpm离心I S min，即得POD粗提液。加入愈创木酚反应混合液后用紫外分光光度计(UV-I 800 )测定470 nm下连续4 min内的吸光值。以每分钟吸光度变化值表示酶活性大小。根据公式，计算出POD活性。每个处理重复3次。
4.可溶性糖的测定
采用葱酮法测定可溶性糖含量(孔祥生，2008;王伟，2010)。称取剪碎混匀的新鲜样品0.5 g加入蒸馏水，在沸水浴中煮沸30 min，冷却后过滤定容。取待测样品提取液加入蒸馏水、蕙酮乙酸乙酷、浓硫酸再在沸水浴中煮10 min，用紫外分光光度计(UV 1800)测定630 nm下的吸光值。每个处理重复3次。
5.可溶性蛋白的测定
采用考马斯亮蓝G-250染色法测定可溶性蛋白含量(孔祥生，2008;郭尚，2010)。称取新鲜百合叶片0.5 g，加蒸馏水研磨成匀浆后，3000 rpm离心10 min即得粗提液。吸取样品提取液加入考马斯亮蓝G-250试剂，混匀后用紫外分光光度计(UV-1800)测定595 nm下的吸光值。每个处理重复3次。
6.钙含量的测定
采用原子吸收分光光度法测定百合植株中的钙含量(鲍士旦，2000)。先把要测量的样品洗净放入65℃烘箱烘干。称取烘干植物样品2.000 g于镍柑祸中，加95%乙醇溶液使样品湿润。然后把柑锅放在电炉上加热至样品呈灰白色为止。
经预灰化后放入高温箱式电炉中，加热到525℃左右，保持约1h，烧至灰分近于白色为止。样品加1.2 mol}L-'稀盐酸加热至沸，使残渣溶解，过滤定容后即为待测液。
吸取待测液加入50 g}L-'氯化锯溶液，再次定容后即可用原子吸收分光光度计测定Ca浓度。根据做出的标准曲线和公式计算植物样品中Ca的含量。每个处理重复3次。其中叶片钙含量测定时为保证试验材料的用量，所取叶片为百合植株中上部叶片。
