番木瓜疫病生防细菌的筛选及室内盆栽防效研究

番木瓜疫病生防细菌的筛选及室内盆栽防效研究

 

摘要：从土壤中分离出的２９个细菌分离物，经平板抑菌试验筛选出对番木瓜疫病病原菌棉桐疫霉（■ＰＡｙｔｏｐＡｔＡｏｒａｐａｉｍｉｖｏｒａ）和辣椒疫霉（ＰＡｙｔｏｐＡｔｆｅｏｒａｃａｐｓｉｃｉ）具有明显枯抗作用的菌株。

结果表明：３个土壤采样点的菌株对番木瓜疫病病原菌呈现不同程度的拮抗作用，效果最明显为黄埔菌株，其中菌株ＨＩ、Ｈ４、Ｈ６和Ｈ９４个菌株对椋榈疫霉的抑菌率为１００％，而菌株ＨＩ、Ｈ２、Ｈ４、Ｈ６、Ｈ７和Ｈ９对辣椒疫霉的抑菌率为１００％，在１％水平上差异极显著。

对具有明显拮抗作用的９个菌株（ＨＩ、Ｈ２、Ｈ４、Ｈ６、Ｈ７、Ｈ９、ＰＩ、Ｐ２和Ｐ４）进行二次筛选，筛选出２个菌株（黄埔菌株Ｈ１和Ｈ４）进行番木瓜疫病室内盆栽防效试验，试验结果表明，Ｈ１对辣椒疫霉的防效为１５．１５％，对棕榈疫霉的防效为１６．６７％；Ｈ４对辣椒疫霉的防效为２７．２７％，对棕榈疫霉的防效为３８．８９％。

 

番木瓜疫病是为害番木瓜的一种常见病害，主要为害木瓜果实及苗，常造成果实腐烂和苗的死亡。研究表明，该病病原菌以棕榈疫霉（ＰＡｊｆｏｐＡｔ／ｉｏｒａｐａｉｍｉｖｏｒａ）为主，其次为辣椒疫霉（ＰＡｙｔｏｐＡｔＡｏｒａＣａ／ＷＣｉ）该病近年来在广东珠三角地区的番木瓜产区经常发生，对大田番木瓜植株危害严重。杜宜新等对大田番木瓜疫病作了ＤＮＡ测序，病原鉴定为棕榈疫霉。

 

目前生产上对番木瓜疫病的防治主要依赖于化学农药。近年来，化学农药的残毒和污染问题逐渐成为人们关注的焦点，而生物防治因其相对高效、环保、安全等优点成为病害防治的发展方向。在各种生物防治方法中，由于细菌具备种类多，繁殖力高，对病原菌作用方式多样和易于人工培养等优势，所以各种生防菌中发展潜力较大，利用生防细菌来防治植物病害已成为国内外研究的热点［３，４］。

 

研究结果表明，细菌在生长过程中会产生抗生素类、酶类和挥发性成分等多种具有拮抗活性的物质，起到直接或间接阻碍病原菌生长或杀死病原菌的效果［５，６］。同时，生防细菌大多从植物的根际和叶围等处分离获得，对植物具有较好的亲和性，接种后易于在植物上定植，生防效果持久稳定ｍ。

 

番木瓜主要用作鲜食水果、蔬菜或食品加工原料，在种植生产过程中应尽可能减少化学农药的施用以提高产品食用安全性。故此，针对番木瓜疫病筛选出有效的生防细菌，不仅有利于番木瓜种植生产，还符合当前农药减量的环境保护要求，有助于提高番木瓜相关产品的食用安全性。但目前国内外对番木瓜疫病生物防治的相关研究未见系统报道。

 

本试验将筛选出对番木瓜疫病病原菌的生长繁殖有较强抑制作用的细菌，并通过二次筛选，模拟大田环境进行室内盆栽防效试验，旨在为开发番木瓜疫病生防制剂打下基础。

 

 

1材料与方法

 

1.1材料

 

1.1.1供试菌

 

番木瓜疫病病原菌棕榈疫霉和辣椒疫霉，由仲悟农业工程学院植物病理研究所提供。

 

1.1.2供试土壤

 

从广州市黄埔区(以下简称H)、白云区(以下简称B)和番禺区(以下简称P)的番木瓜果园取样，每个果园取5个样。

 

1.1.3培养基

 

马铃薯葡萄糖培养基(PDA)，牛肉蛋白脉培养基(NA)，NB培养液，发酵液(PD)液体培养基。配方参考《植病研究法》。

 

1.1.4番木瓜组培苗

 

‘穗中红48番木瓜’组培苗，株高约15cm，冠幅约23cm，叶片数8片，长势良好且一致，由广州市果树科学研究所提供。

 

1.2方法

 

1.2.1细菌的分离与纯化

 

参考((植病研究法》，使用土壤样品配制成10%(W/W)的悬浊液后，静置5min，取上清液为10-稀释菌液;取10-稀释菌液1mL加人9mL无菌水中，充分混匀为10-2稀释菌液;取10-2稀释菌液1mL加人9mL无菌水中，充分混匀为10-3稀释菌液。

 

分别将10-}10-2}10-稀释菌液涂布于NA平板中，30℃恒温培养2d后，挑取不同形态和颜色的单菌落在NA培养基上进行多次画线分离，直到获得纯培养物;将纯培养物转接到斜面培养基上，4℃保存备用。

 

1.2.2拮杭细菌的筛选

 

采用平板对峙培养法[[9]，在PDA平板的一端打一直径为5mm小孔，在孔内注人一定浓度的纯化细菌菌液;在菌落边缘处取直径为5mm的番木瓜疫病病原菌饼，接种于平板距小孔中心4cm处;28℃培养6d后测量菌落直径，计算各处理对病原菌生长的抑菌率，观察病菌菌丝生长情况，并分析筛选出有明显抑菌作用的菌株。以NB培养液为对照，每处理重复3次。

 

其中，对病菌生长的抑制率(%)=[(各对照菌落直径一各处理菌落直径)/各对照菌落直径〕x100%。

 

将初选出的菌株使用相同方法进行二次筛选，取抑菌效果最好的2个菌株进行番木瓜疫病室内盆栽防效试验。

 

1.2.3幼茎针刺接种法

 

在番木瓜组培苗的幼茎处(距顶部4一5cm)，用昆虫针刺8一10个针孔，以浸泡混合菌液(生防菌+疫霉菌)的脱脂棉包扎针刺伤口处，以疫霉菌液(棕桐疫霉菌液棘椒疫霉菌液)为对照，在28}C、湿度85%环境下处理7d后观察组培苗发病情况，按表1的标准记录发病级数，处理数据，计算病情指数及防效。每处理6个重复。