防治胡椒瘟病生物农药筛选及其盆栽药效试验
摘要胡椒瘟病是危害中国胡椒产业的首要病害，目前主要依赖使用化学农药防治，筛选应用生物农药是减少化学农药用量的有效途径。
本文通过室内毒力测定和室外盆栽药效试验，测定了5种生物农药对胡椒瘟病的防治效果。结果表明：室内毒力测定木霉菌WP、枯草芽孢杆菌WP和Z菌株发酵液对胡椒瘟病病原菌的抑菌效果好且敏感性高，EC50分别为0.49、0.78、1.13μg/mL；盆栽药效试验Z菌株发酵液和枯草芽孢杆菌WP对胡椒瘟病防效最好，平均防效分别为83％和82％，芽孢杆菌/淡紫拟青霉WP的防效次之，平均防效为69％。综合来看，Z菌株发酵液和枯草芽孢杆菌WP对胡椒瘟病具有很好防效，具备良好的绿色防控潜力。
胡椒（Pipernigrum）是一种重要的世界热带特色香辛作物，在食品、医疗保健等领域用途广泛，产品附加值高。海南是中国胡椒的主产地，其种植面积和产量均占全国总量的98％以上，目前种植面积达27000hm2，年产值约30亿元，已成为近百万热区农民致富的特色优势作物。
胡椒瘟病是危害我国胡椒生产的首要病害。该病是由辣椒疫霉菌（Phytophthoracapsici）侵染引起的一种传染性很强的土传性病害，病情严重的胡椒园损失达90％以上，甚至全园毁灭[1-2]。
目前，防治该病害依赖化学农药，出现农药越打越多、病害越防越难的问题。实现农药减量控害，十分必要。应用生物农药替代化学农药，是实现农药减量的主要途径。
目前，防治该病害依赖化学农药，出现农药越打越多、病害越防越难的问题。实现农药减量控害，十分必要。应用生物农药替代化学农药，是实现农药减量的主要途径。
国内外已经有许多文献报到利用生物农药防治田间病害具有良好的效果和推广应用前景[3-5]。可利用来防控病害的生防菌来源也是多样的，包括一下几类：
（1）天然生存于作物根际的根际促生菌（Plant-Growth-PromotingRhizobacteria，PGPR）；
（2）无致病能力的病原菌；
（3）具有抑菌或者诱导寄主产生菌根的真菌[6-8]。
这些生防手段通常有着广谱性好、持续性强和对环境友好的特点，在绿色农业的创建上有着很强的应用潜力和应用空间。
本文通过室内毒力测定和室外盆栽药效试验，筛选出对胡椒瘟病防效好的生物农药，提高病害绿色防控技术水平，以期为促进中国胡椒产业绿色可持续发展提供技术支撑。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1供试品种胡椒盆栽苗选用印尼大叶种，由中国热带农业科学院香料饮料研究所提供。
1.1.2供试菌种辣椒疫霉（Phytophthoracapsici），2013年11月由笔者从香饮所胡椒种植基地采集的叶片中分离、鉴定所得。
1.1.3供试培养基PDA培养基：马铃薯200g，葡萄糖16g，琼脂20g，水1000mL，pH自然。马铃薯去皮，切块煮沸30min，用纱布过滤后加入葡萄糖糖和琼脂，用去离子水定容后加热融化分装，121℃灭菌20min。
1.1.4供试药剂涉及药剂见表1。其中化学农药70％烯酰·嘧菌酯WG在本研究中作为一个化学农药对照。
1.2方法
1.2.1室内毒力测定
首先，通过预实验确定不同供试药剂的浓度梯度[9]，将不同浓度梯度的供试药剂溶液加入PDA培养基中，各供试药剂有效成分在PDA培养基中含量见表1。
采用生长速率法[10]，测定供试药剂对胡椒瘟病菌的抑制作用。培养72h后检查各处理菌的生长情况，十字交叉法测量菌落直径，计算抑制生长率。
抑制生长率/％=（对照菌落直径-处理菌落直径）/（对照菌落直径-菌饼直径）×100％。将抑制率转化为几率值，将剂量取对数，求出毒力回归方程[11]，进一步算出EC50。
1.2.2盆栽药效试验
将胡椒瘟病菌培养7d长满培养皿后，用打孔器在菌落边缘制成直径为1cm菌饼。取长5cm、厚0.5的正方形无菌棉块，用无菌水浸湿。然后每个无菌棉块上放2个菌饼，包裹起来做成接种菌包。
用接种针在盆栽苗胡椒主根地下2cm处刺伤3次形成伤口。在胡椒主根外围2～3cm处挖一个宽3cm、深6～8cm的小坑，把一个接种菌包放进小坑，覆土浇水培养，每隔1d浇水1次。接菌前，将供试药剂稀释1000倍灌施2次，施药时间分别在病原菌接种前7d和接菌前1d，每次每株灌施500mL，以接菌不施药的植株为对照。
试验中，一种药剂设为一个处理，每个处理设3次重复[12]，每个重复10株。在对照处理出现病害症状后开始调查，隔5d调查1次，共调查3次[13]。按病情指数计算防治效果[14]。
胡椒整株瘟病病情分级标准：0级：整株叶片健康，主蔓基部无病灶；1级：植株下层少数叶片出现病害症状，主蔓基部无病灶；3级：植株上下层均有叶片感病，主蔓基部无病灶；5级：植株长势变差，叶片失绿，无落叶或有少量落叶，主蔓基部局部出现病害症状；7级：植株发生青枯、大量落叶，主蔓基部变黑腐烂。
病情指数=∑（各级病株数×该病级级值）/（调查胡椒株总数×最高病级值）×100。
防治效果/％=(对照病指-处理病指)/对照病指×100。
