生物杀菌剂对番茄盆栽的影响 图片

1材料和方法

 

1.1供试材料

 

菌株由内蒙古农业大学提供，番茄品种CM966。

 

5种化学杀菌剂：50%啶酰菌胺水分散粒剂（巴斯夫欧洲公司）、500g/L异菌脲悬浮剂（江苏省苏州富美实植物保护有限公司）、50%乙霉多菌灵可湿性粉剂（江苏蓝丰生物化工股份有限公司）、50%腐霉利可湿性粉剂（日本住友化学株式会社）、40%嘧霉胺悬浮剂（陕西恒田化工有限公司）；2种生物杀菌剂：3×108CFU/g哈茨木霉菌可湿性粉剂（美国拜沃股份有限公司）、3×109CFU/g甲基营养型芽孢杆菌可湿性粉剂（华北制药集团爱诺有限公司）。

 

1.3供试培养基

 

马铃薯葡萄糖琼脂培养基：马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂20g、蒸馏水1000mL。

 

1.4菌落直径法测定药剂对番茄盆栽灰霉病菌的抑菌效果

 

为了准确测定供试7种药剂对灰霉病菌的室内毒力测定，保证药剂在稀释过程中分布均匀，以达到更好的悬浮效果，减少试验误差，将5种供试化学杀菌剂先配成母液，之后稀释成5个系列有效成分含量。

将PDA培养基灭菌并冷却至50℃左右，与配好的5个系列有效浓度药剂按体积比9∶1混合，制成5个系列浓度、直径9cm的含药平板，以不加药剂的处理为对照，在每个培养基表面放入1个直径5mm的供试病原真菌菌饼，置于20℃培养箱中培养，每处理重复3次[4]。

 

将2种生物杀菌剂分别做如下处理：

 

（1）哈茨木霉菌生物杀菌剂制成悬浮液涂布于PDA平板上进行培养，取恒温（25℃）培养7d的产孢哈茨木霉菌，用10mL无菌水将哈茨木霉菌孢子冲下后依次制成999，855，750，666，600μg/mL的孢子悬浮液。

用移液枪吸取孢悬液加入已灭菌的培养基中（孢子液∶培养基=1∶9体积比）制成含哈茨木霉菌PDA平板，然后用打孔器打取灰霉病菌菌饼（直径5mm）接入含哈茨木霉菌孢子的PDA平板上，试验重复3次。在25℃恒温培养箱中培养2d，采用十字交叉法测量番茄盆栽灰霉病菌的菌落生长直径，取其平均值，计算菌丝生长相对抑制率；

 

（2）甲基营养型芽孢杆菌生物杀菌剂制成悬浮液后涂布于LB培养基上进行培养，培养3d后将其接种于装有50mLLB液体培养基的三角瓶中，30℃、220r/min振荡培养48h。

 

收集发酵液，离心（10000r/min，4℃），将上清液用0.22μm滤膜过滤除菌即可得到无菌发酵液，在无菌条件下，用融化的PDA培养基依次配制成含666，300，186，50，18μg/mL发酵液的平板培养基，以不加发酵液的培养基为对照，在每个培养基表面放入1个直径5mm的供试病原真菌菌饼，每个处理3次重复，28℃恒温培养3~4d后，十字交叉法测量菌落直径，计算菌丝生长相对抑制率。

 

将7种供试药剂按如下有效成分含量进行室内毒力测定：（1）哈茨木霉菌：999，855，750，666，600μg/mL；（2）甲基营养型芽孢杆菌：666，300，186，50，18μg/mL；（3）啶酰菌胺：555，500，415，385，335μg/mL；（4）异菌脲：1110，1000，905，835，770μg/mL；（5）乙霉多菌灵：1665，1430，1250，1110，1000μg/mL；（6）腐霉利：715，665，625，590，555μg/mL；（7）嘧霉胺：832，768，716，668，624μg/mL。培养3~5d后采用十字交叉法测定菌落直径并记录。根据以下公式计算7种药剂对菌丝生长的相对抑菌率、抑菌率几率值、毒力回归方程以及EC50值。

 

相对抑菌率/%=［对照菌落直径（mm）-处理菌落直径（mm）］/对照菌落直径（mm）×100（1）抑菌率几率值（y）=NORMINV（相对抑菌率，5，1）（2）毒力回归方程：y=ax+b，当y=5时，求出的x值为EC50值的对数（3）EC50=POWER（10，EC50值的对数）（4）

 

1.5盆栽试验

 

通过室内毒力测定，筛选出5种化学杀菌剂及2种生物菌剂最佳用药浓度，即啶酰菌胺、异菌脲、乙霉多菌灵、腐霉利、嘧霉胺的有效成分含量分别为555，1110，1665，715，832μg/mL；2种生物杀菌剂哈茨木霉菌、甲基营养型芽孢杆菌的有效浓度分别为999，666μg/mL。7种药剂分别以此有效成分含量进行盆栽试验，每盆种植2株幼苗，重复3盆。

 

将培养好的培养皿中的灰霉病菌用打孔器打出相同面积的菌片，将菌片接种到番茄叶片上，前12h暗培养，湿度保持在95%以上，然后置于光照和黑暗各12h的20℃，湿度在90%以上的条件下进行培养[5]，生物杀菌剂在接菌之前进行喷施，其余药剂在番茄叶片发病初期进行喷施，每隔5d调查病叶数。