1.3.1 外植体
通常，我们将由活体植物上取下来的用于接种培养的植物细胞、组织或器官称之为外植体。不同的外植体其发育程度不同，它们发生脱分化、再分化的能力也存在巨大差异[10]。外植体的选取是植物组织培养过程的基础环节，对组织培养的成败有着至关重要的作用[11]。一般认为幼嫩的外植体分化程度较低，在组织培养过程中通常能取得较理想的效果[12]。美国科学家Tuleckel[13]曾于 1987 年统计了已经成功实现体胚发生的 60 余种植物，其中有近三分之一都是采用胚为外植体，而采用其它营养器官作为外植体进行诱导都十分困难。
冯晓英等[14]分别采用了“忽忘我”嫩茎与嫩叶作为外植体进行诱导培养，虽然都诱导产生了不定芽，但嫩茎的诱导效果更理想。植物的根、茎、叶、花、种子等等都是常用的外植体，在玉露的组织培养研究中，通常采用花茎、叶片为外植体。宋杨[15]以冰灯玉露幼嫩花茎为外植体，诱导产生了再生植株。郜李彬等[16]分别选取幼嫩花茎与叶为外植体进行诱导，结果表明，幼嫩花茎初代培养污染率更低，且诱导成功率明显高于叶片。
1.3.2 外植体消毒
多肉植物组织培养阶段，植物一般生长在无菌环境中，在自然条件下生长的植物表面一般都带菌，外植体带菌是组织培养过程中的污染现象发生的主要原因之一[17]。常用的消毒剂有 0.1%～0.2%升汞（Hg Cl2）、70%～75%乙醇（C2H5OH）、2%～10%次氯酸钠（Na Cl O）、3%～10%双氧水（H2O2）等。其中升汞的杀菌效果最强，但使用后难以清洗，易引起外植体褐化，所以在使用后需要用无菌水多次清洗；乙醇的消毒作用十分有限，但渗透性强，先采用 75%乙醇消毒 30～60s，再使用其它消毒剂，可增强其它消毒剂的效果。不同的消毒剂各有其优缺点，在使用时，我们根据外植的状态需求使用不同的消毒，从而达到理想的效果。
1.3.3 植物生长调节剂
多肉植物生长调节剂是一类对植物生长发育起着调节作用的化学物质，它包括人工合成化合物和天然植物激素，它们在植物组织培养过程中起着至关重要的作用。植物组织培养中常见的植物生长调节剂主要分为五类：生长素（包括 2,4-D、NAA、IBA、IAA 等）多用于诱导愈伤组织、生根培养、促进植物生长等过程；细胞分裂素（包括 6-BA、KT、ZT 等）主要作用为促进细胞分裂，能够抑制植物的顶端优势，产生大量的丛生芽，在植物愈伤组织再分化过程中，起着重要作用[18]。组织培养中应用较多的还有 GA3、ABA、乙稀利等等，它们之间存在着协同或拮抗作用，通过不同浓度的配比培养，调节着组织培养过程中植物的细胞、器官发育及形态建成[19]。
1.3.4 基本培养基
基本培养基主要是要植物培养阶段提供所需的矿质营养元素以用维生素，最早培养基采用马铃薯汁，经过多年的研究深入，基本培养基的种类与成分也越来越多样化。不同的基本培养基其营养是不一样的，植物在不同的基本培养基上的生长状况也存在巨大差异。
Murashige 和 Skoog[20]利用一种高盐浓度的培养基培养烟草组织，使其组织大量生长，这种培养基也是目前使用最为广泛的 MS 培养基。孟志霞等[21]研究了基本培养基对铁皮石斛幼苗生长的影响，发现不同的基本培养基对其生长存在显著差异，应根据不同的植物、不同培养目的以及不同培养阶段应选取不同的基本培养基。
有研究发现分别选取了 MS、LS、WPM、NT 等基本培养基对黄波罗愈伤组织进行培养，选用 NT 培养基的愈伤组织增殖量最多，其它种类培养基均效果不佳，且在MS 培养基中培养发生严重的褐化现象[22]。张妙霞等[23]在柿树的组织培养中研究发现，低浓度的无机盐培养基对柿树的生长发育及分化均有促进作用，并且可有效抑制褐化现象的发生。
1.3.5 培养条件
植物组织培养中，不同植物其生存环境是存在差异的，它们对光照、温度、湿度等都有着不同的要求。这些环境条件大多可以作为信号或应激条件对植物的生长发育及形态建成产生影响[24]。 Lian 等[25]人研究了红光、蓝光、红蓝混合光、荧光灯以及黑暗条件下的百合鳞片再生情况和后期生长的影响，结果表明，使用荧光灯为光源 30d 培养后，百合再生频率显著高于其它光源的处理，但红蓝混合光下，两生的小鳞茎生长最高。短期的黑暗条件处理一般可以缓解对植物造成的伤害。有研究发现，美国山核桃组织培养中外植体消毒后，早期经过一周的暗培养可有效降低褐化现象的发生[26]。朝建军等[27]认为，适当增加光照强度或延长光照时间，可在一定程度上缓解植物玻璃化程度。
在组织培养中对植物的器官分化以及胚状体的形成有着重要的影响，适宜的温度条件也可以克服植物褐化或玻璃化现象的发生[28]。高温条件下，植物体内多酚氧化酶的活性会增加，从而促进氧化，使植物更容易发生褐化[29]。
