景天科青锁龙属青锁龙,双子叶植物,多年生草本。原产于纳米比亚,喜温暖干燥和阳光充足的环境,怕低温和霜雪,耐半阴。对土壤要求不严,以泥炭土加粗沙为好。花着生于叶腋部,很小[1,2]。
1材料与方法
1.1材料(1)生长良好的青锁龙。(2)不同浓度培养基:1/2…MS粉2.47…g/L、蔗糖30…g/L、琼脂粉7…g/L。…(3)愈伤组织培养基配制药品比例与不定芽培养基配制药品比例分别见表1、2。
1.2试验方法配
制含有不同浓度激素组合的培养基,将青锁龙的叶与茎在无菌操作台内接种至培养基内,放在相同的环境条件下培养。挑选出长有较好条件愈伤组织的外植体,将愈伤组织接种至含有新组合激素的培养基中,观察不定芽的生长状况。
挑选出长有较好条件愈伤组织的外植体,将愈伤组织接种至含有新组合激素的培养基中,观察不定芽的生长状况。
2结果与分析
2.1愈伤组织6组愈伤组织诱导结果均良好,诱导出的愈伤组织形态相似(见图1)。经过一段时间的生长,可以观察到完整的愈伤组织形成过程。愈伤组织开始呈现嫩绿色,经过一段时间的继续生长后,愈伤组织增多,形成团状物,且颜色由嫩绿色逐渐变为深绿色,且在团状愈伤组织的表面有1层白色绒毛状物质覆盖。在试验后期,经观察发现,如果愈伤组织在缺乏激素的条件下继续生长,老化,会呈现暗红色,直至干枯。
2.2不定芽在6组含有不同浓度激素的培养基中,经过4个…月的培养,有部分芽成功诱导(见图2),其诱导率见表3。诱导率=诱导出芽的植株数/接种总数(去除污染植株)。
3分析与讨论
3.1愈伤组织质量
青锁龙的愈伤组织相比景天科其他进行过组织培养的植物更容易诱导出,并且在有培养基污染的情况下,青锁龙的愈伤组织在转移至洁净培养基后依旧能正常生长,说明青锁龙愈伤组织自身具有一定抗性[3,4]。青锁龙愈伤组织的生长状况总体都非常好,一方面,愈伤组织的生长速度相比许多植物都快速得多,另一方面,在愈伤组织的质量上,青锁龙相比景天科其他植物质量很好[5]。
3.2愈伤组织生长的最佳激素浓度组合
3.2.1茎…在诱导愈伤组织时,采用2种形态的外植体,其中之一是剥离所有叶片的茎段。相比叶片,茎段能更快地形成愈伤组织[6],并且在适当的激素浓度下,在形成愈伤组织后能继续在愈伤组织上形成新的小芽,甚至不需要后期重新配制诱导不定芽的培养基。以茎段作为外植体,诱导愈伤组织的最佳激素浓度组合(6-BA∶NAA=1∶0.1),在这组培养基中,接种的茎段能快速且大量形成愈伤组织。但是值得注意的是,茎段相比叶片更容易受到污染。在本次试验中,接种的茎段相比叶片的数量要少很多,其中大部分茎段都受到污染,最终无法使用。
3.2.2叶…在诱导愈伤组织时,除采用茎段作为外植体,还采用叶片作为外植体。相比茎段,叶片产生愈伤组织的速度要稍慢一些,但是叶片的污染率相比茎段要小很多。在实际生产中,叶片作为外植体,才能使青锁龙以组织培养的方式大量繁殖[7]。以叶片作为外植体,诱导愈伤组织的最佳激素浓度组合与茎段相同(6-BA∶NAA=1∶0.1)。这也说明,无论以植物体何种部位作为外植体形成愈伤组织,所需的激素以及激素浓度都相同。
3.3不定芽生长的最佳激素浓度组合在含有不同激素浓度的培养基上诱导不定芽,…通过试验可以发现,与诱导愈伤组织时非常高的成功率不同,不定芽诱导的成功率大部分都不高,其中4组在20%左右A(NAA∶6-BA=1∶0.1)、C…(NAA∶6-BA=2∶0.1)、D(NAA∶6-BA=2∶0.5)、E…(NAA∶6-BA=0.5∶0.1),而F(NAA∶6-BA=0.5∶0.5)的成功率为0;在F组培养基中,没有不定芽成功诱导出。在这6组培养基中,(NAA∶6-BA=1∶0.5)组为成功率最高的1组,为60%。